南宫28品牌的人胚肺成纤维细胞MRC5培养说明书简要说明：

一、细胞培养条件

细胞名称：人胚肺成纤维细胞MRC5
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：MEM + 10% FBS + 1% NEAA + 1% 丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P
传代方法：第一次建议1:2传代，传代情况每2天换液。
备注：用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养；如对比培养效果不佳，建议直接购买南宫28的完全培养基。

二、细胞收到后处理

细胞运输后，待培养至良好状态时，灌满完全培养液并封好瓶口是最佳方案。收到细胞后，先用75%酒精消毒整个细胞瓶，然后在超净台内进行无菌操作。细胞瓶应放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，之后再做处理。显微镜观察细胞生长，并拍照保存（建议40x，100x，200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，若未提供照片，则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若汇合度未超过80%，则将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，在37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃孵箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。
3. 细胞变圆并脱落后，迅速添加5ml完全培养基终止消化。
4. 吸出细胞悬液，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
5. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，并在显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化。
3. 转移悬液至15ml离心管中，进行1000 RPM离心5分钟。
4. 弃去上清，加入1ml南宫28无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
5. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需先在-80℃冰箱存放24小时。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶，随后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

细胞在运输过程中若脱落属于正常现象。若脱离较多，可将培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。随后，可加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，消化1-2分钟后终止反应，再次离心并重悬，进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入培养箱中。

五、售后条款

1）细胞问题导致的重发情况及判定标准：
- 细胞运输过程中造成的丢失、破损、漏液等，重发；
- 收到产品48小时内提供真实实验结果，如有污染则重发；
- 常温发货的细胞，静置24小时后细胞不存活，需真实照片，重发；
- 干冰发货细胞复苏不良或常温发货细胞静置未开封后出现污染，重发；
- 细胞活性问题需在7天内提供真实实验结果，重发；
- 收到当天及第2、3天拍照，如不提供视为合格；
- 4-7天内出现问题需提供细节和照片由技术人员判定责任，重发可能；
- 若责任属于双方，则进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。

2）不予重发的情况：
- 客户造成的细胞污染；
- 不正确的操作导致细胞状态异常；
- 非南宫28推荐的培养体系导致细胞状态不良；
- 未提供培养前3天照片；
- 培养过程中有其他处理；
- 收到后2天未告知；
- 具体情况而定。