南宫28产品及特点：本产品基于探针法荧光定量PCR原理开发而成的检测试剂盒，具备多项显著特点：

1. 即开即用，用户仅需提供样品DNA模板。
2. 经过优化的引物等组分具备高灵敏度。
3. 附带阳性对照，方便区分假阴性样本。
4. 特异性强，引物设计依据中间普雷沃菌DNA序列中的高度保守区，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。
5. 可用于定性及定量检测，在定量检测时，线性范围至少可涵盖5个数量级。
6. 本产品足够支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 本产品仅限于科研使用。

南宫28的使用方法如下：

一、DNA提取（样本制备区）

选用自定义方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒兼容市场上大多数核酸提取试剂盒。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

（由于阳性对照浓度较高，因此以下稀释操作应在独立区域进行，以避免样品或本试剂盒其他成分的污染）：

1. 标记六个离心管，分别命名为7，6，5，4，3，2。
2. 使用带芯枪头向每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，即得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，放冰待用。
4. 更换枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，即得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，放冰待用。
5. 重复上述操作，直至得到六种稀释度的标准曲线样品，放冰待用。如不需要制作标准曲线，将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL可。

三、试剂配制（试剂准备区）

若有N个待检样品，准备N+2个qPCR管（N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照），向各PCR管中分别加入以下成分（详细说明请查阅说明书）并转移至样本准备区。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中分别加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，随后离心30秒，立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器的相应位置，进行扩增，扩增程序详见说明书。

六、结果分析

1. 如果制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再根据待测样品的Ct值推算样品DNA浓度的log值，得到其浓度。
2. 如果未制作标准曲线，结果判定标准如下：
阳性对照结果：Ct值<30，显示明显的指数增长，并呈现典型S型曲线。
阴性对照结果：Ct值为38或无Ct值，未显示明显的指数增长期和平台期。
样本检测结果：Ct值<35，显示明显指数增长，表明样本中检测出婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值为38或无Ct值，表明样本中未检测出婴儿利什曼虫，结果为阴性；Ct值在35-38范围，应复检样本，如重复实验结果仍在该范围且有明显指数增长，则判定为阳性，反之为阴性。

南宫28运输及保存：低温运输，-20℃保存，有效期为一年。阳性对照需单独放置，注意避免污染其他试剂。